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ABGENT為客戶提供開放式平臺,幫助客戶解決售前、售中、售后遇到的各種常見問題。我們也歡迎您發郵件或來電咨詢,ABGENT將竭誠為您服務。

ABGENT產品

請參照產品訂購指南進行訂購或定制ABGENT產品,您也可通過以下方式與我們取得聯系。電子郵件:[email protected],電話:0512-69552409 / 0512-69552906。

我們的產品目錄號提供了相關信息:AE、AF、AP表示多克隆抗體,AJ、AM、AO、AT表示單克隆抗體,實際判斷請以抗體說明書為準。

我們的單克隆抗體大多是通過BALB/c小鼠制備的,多克隆抗體大多是通過新西蘭兔制備的。客戶抗體定制服務也主要是使用這兩種動物。

我們常規使用的抗原包括天然的蛋白、重組蛋白和合成多肽。如果合成多肽分子量小于8 kDa,需通過半胱氨酸的巰基將多肽偶聯到KLH或BSA上。

如果您想了解我們抗原的詳細信息,包括多肽序列,您可以通過電子郵件[email protected]把您的需求告訴我們,我們會及時給您回復。

不會,我們的磷酸化抗體都是依次經過對應的非磷酸化多肽和磷酸化多肽兩步親和純化得到的,是磷酸化抗原位點特異性的,不會與非磷酸化抗原產生交叉反應。

抗體效價通常用ELISA來檢測,我們使用ELISA板條包被抗原并洗去未結合的抗原。在ELISA檢測中我們使用的是未經偶聯的多肽。逐步稀釋的抗體被加入ELISA板孔內,并洗去未結合的抗體。最后加入標記的二抗,通過顯色的數值反應抗體的效價。

① 增加轉印時間。

② 在轉印緩沖液中添加0.01%或0.02%的SDS以提高蛋白從膠中轉出的效率。

③ 減少轉印緩沖液中甲醇的量。

④ 使用低濃度的膠更利于轉印。

使用PVDF膜時需要經過多步嚴格的封閉過程。可以通過增加2-5倍封閉液的濃度,延長封閉時間(如封閉液孵育過夜)和在37℃下進行封閉來提高效果,通過封閉液與空位點結合來消除背景,并與膜蛋白結合降低其與一抗的非特異性結合。 一些常用封閉液有脫脂奶粉,BSA和干酪素。

多克隆抗體的Western Blot檢測結果通常會出現多條帶,我們通過對免疫后血清和免疫前血清的檢測結果進行比較:在抗體和免疫后血清中都出現而免疫前血清中未出現,且符合預測分子量的條帶,就可以認為是特異性的目標條帶。

造成Wester Blot實驗重復性差的因素很多,可以從以下幾個方面考慮:

① 抗體的保存條件是否嚴格;

② 抗體稀釋后工作濃度很低不能反復使用;

③ 檢測樣品是否含有目標蛋白?細胞裂解液中的目標蛋白含量會因細胞數量、藥物作用時間;

④ 細胞通道數量和儲存條件不同而發生變化,導致檢測結果的變化。

在ABGENT的Western Blot實驗流程中有一些細節是避免背景深和沒有結果的關鍵。

① 不要過度清洗膜,膜的清洗使用含有0.1% Tween-20的TBS,3次,每次5分鐘即可。過度的清洗可能會把一抗洗掉。合適的清洗條件能夠很好的消除背景并得到最好的結果。

② 不要過長時間的封閉。過度的封閉會導致信號減弱。

③ 請確認您所要檢測的抗原是否是產品說明書上所列舉的抗原種屬。

我們并沒有對我們的抗體進行全組織裂解液的測試,但有客戶使用我們的一些抗體應用于全組織裂解液。

我們的IHC實驗中使用微波爐修復法,中高火,時間6-8分鐘。

該抗體確實沒有進行過IP檢測,但有WB或IHC的檢測結果,對于有WB或IHC檢測結果的抗體我們原則上不提供免費試用。

純化抗體保存在PBS中并加少量防腐劑;抗血清以原始的血清形式保存不添加防腐劑。抗體在-20℃下可保存數年。抗體需避免反復凍融,反復凍融可能會導致抗體蛋白的降解,建議使用前進行小樣分裝。

ABGENT的抗體產品保存在含有0.09%(W/V)疊氮化鈉的PBS溶液中。疊氮化鈉是在純化結束后立刻添加,因此我們很難提供不含疊氮化鈉的抗體。最好的解決方法是通過透析或超濾去除疊氮化鈉。

如您在使用ABGENT抗體產品獲得好的實驗數據,并愿與我們分享這些數據,經過ABGNET審核符合ABGENT上線標準的,我們將提供以下之一作為獎勵:

① 提供一張抗體優惠券,您可憑此券免費或者以優惠的價格購買我們的抗體產品。

② 提供精美禮品一份。

如果您發表的文章引用了ABGENT的抗體產品,并愿意把相關信息提供給我們發布在網上,您可以從我們的產品目錄中任意選擇一支免費AP/AM的小包裝抗體。具體情況請與我們的銷售部門聯系 :[email protected]

按抗體說明書建議的稀釋倍數,用 TBST 溶液稀釋一抗。如果未取得理想實驗結果,則參照一般推薦的稀釋倍數上下浮動一個數量級進行一抗稀釋進行預試驗,然后根據試驗結果選擇合適稀釋倍數,一抗濃度過高會導致產生非特異性條帶,過低會導致條帶較淡或得不到條帶。

ABGENT官網所推薦的實驗應用和推薦稀釋比均來源于ABGENT官網產品說明書上的陽性對照。

下載產品反饋表,詳細填寫您的個人信息、產品信息、實驗信息并附實驗圖片后,將此表發送至郵箱[email protected],我們會在1-2個工作日內回復并與您溝通實驗情況。對于受理安排復檢的抗體,我們會在7個工作日后告知您我們的復檢結果。如果我們復檢結果與ABGENT官網產品說明書不一致,我們將提供換貨或退款服務。如果抗體用于ABGENT官網未測試的物種或應用,我們不提供換貨或退款服務。

首次使用ABGENT抗體產品的新客戶,請下載ABGENT抗體試用裝申請表,并詳細填寫申請表中所需內容,填寫好后請將此表發送至[email protected]。我們會在1-2個工作日內有專人回復并與您溝通確認試用裝發放情況。

我們有時不得不停產某種產品。導致這種情況出現的原因有很多,比如滯銷、貨源中斷或生產困難。有時可能是質量問題,但并非總是如此。我們理解停產給您帶來的不便,特別是已經使用了一段時間的抗體。當您在ABGENT官網上用關鍵詞搜索停產產品時,您可以選擇ABGENT官網上相關的替代產品。請您仔細檢查,確保供選的相關抗體適合您的實驗應用和種屬。如果不適合,請搜索我們的目錄尋找其他適合的替代品。

任何在我們網站列出為不能獲得的抗體,我們將不再銷售。

ABGENT服務

我們能提供給客戶不同量(通常3-30mg)、不同純度(50-98%)的多肽。多肽的長度最多可以達到100個氨基酸,同時可以對多肽進行磷酸化、甲基化、乙酰化、生物素的修飾以及FITC、Rhodamine、TAMRA標記。

是的,我們能夠提供長序列的或者環化的多肽合成。我們有豐富的經驗合成長度達到100個氨基酸的多肽以及多肽的修飾。

我們對多肽進行反相HPLC純化,請您在確認多肽合成的訂單時告知我們您的多肽純度要求。

所有的多肽都以凍干粉末形式提供,必須在-20℃條件下保存才能保證多肽長期穩定。使用前要在干燥器中將多肽恢復到室溫避免多肽吸水。可以在4℃短期保存,一旦溶解了多肽,長時間的溶液保存會造成緩慢的多肽降解,如Cys、Met、Trp的氧化和Gln的脫酰胺化,此外Cys會形成彼此間或者內部的二硫鍵。

多肽的溶解性和它的序列有關,ABGENT的多肽產品同時還包括多肽的分析數據以及建議溶劑的信息。通常溶解酸性多肽使用10%碳酸氫銨溶液,堿性多肽使用30%乙酸,疏水性多肽使用少量DMSO。對于水溶性不好的多肽,可以使用有機溶劑,如DMSO、DMF、DMA、異丙醇和甲醇等。

通常重組蛋白上的GST(谷胱甘肽S-轉移酶)或MBP(麥芽糖結合蛋白)標簽分子量較大,含有許多抗原位點,在免疫時會成為抗原從而影響特異性抗體的制備。所以作為抗原的重組蛋白最好不帶有GST或MBP標簽。一些小分子量的標簽,如His、Myc、Flag基本不會影響特異性抗體的制備。ABGENT用于制備抗體的蛋白通常采用此類小分子量標簽。

在制備重組蛋白時,通常情況下E.coli的表達系統優于病毒和昆蟲的。主要的區別在于需要表達的蛋白的性質、使用的表達載體、E.coli的菌株或者細胞株。根據我們的經驗,從1000毫升E.coli的培養菌液中能純化出10-100毫克重組蛋白,但病毒或者昆蟲表達系統只能得到數百微克。

① 如果您的抗原是合成多肽,通常需要5mg以上。對于需要做親和純化的項目,需要額外提供3-4mg多肽。提供的多肽要求是凍干粉。

② 如果抗原是蛋白,建議您提供3-5mg濃度為1mg/ml以上的蛋白并注明蛋白保存的緩沖液和蛋白濃度。對于需要做親和純化的項目,需要額外提供3-4mg蛋白用于親和純化。

該量同時適用于單抗和多抗的常規制備。

我們會對您所要制備抗體的蛋白全長序列進行分析,來設計1-5條多肽。多肽的親水性、疏水性、空間結構、undefinedbeta;折疊傾向、同源性以及多肽長度(通常10-20個氨基酸)在多肽設計時都會考慮在內,確保多肽最好的免疫原性。客戶的意見和合成的方便程度也是多肽設計時需要考慮的。

我們的制備服務出于為客戶節省成本考慮,不同的套餐有不同的價格,請您根據自己的需要選擇。比如我們的單克隆抗體制備可以根據您需要的的克隆數調整套餐價格。

我們的抗體制備一般都保證ELISA結果在1:4000以上,WB、IHC等檢測結果受抗原影響比較大,抗原是多肽還是蛋白、多肽抗原的設計、抗原的純度等等都會影響抗體的質量。 另外在我們的制備服務中有一種服務可以保證WB或IHC陽性結果,我們會針對您的全蛋白設計3段抗原位點,啟動三個抗體制備項目,這樣,我們至少可以保證一個項目的成功。當然,您可以以遠低于3倍單個項目的價格獲得這項服務。

我們可以根據客戶的建議改變抗體制備流程,但我們并不推薦您這樣做。我們的流程是根據我們長期的經驗和實驗結果來制定的,我們會盡最大努力給客戶提供最好的產品。

對于客戶定制的多克隆抗體項目,我們會采集免疫前的血清小樣和免疫后第六周的血清小樣提供給客戶進行檢測評估。如果您在免疫后第六周之前終止項目,需要支付訂單上50%的費用,如果超過第六周,您需要支付全部費用。

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